直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶說明書

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產(chǎn)品詳情

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Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造，尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型。擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/ min（72℃）。

特點(diǎn)

· 無外切酶活性，適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型；

· 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過40 min；

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸；

· 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個(gè)活性單位（U）。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

運(yùn)輸與保存

-20℃保存 冰袋運(yùn)輸

適用范圍

· 溶解曲線法基因分型/SNP測(cè)定；

· 菌落PCR；

· TA克隆PCR產(chǎn)物添加3’-dA；

· DNA熒光標(biāo)記；

· 血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR。

應(yīng)用舉例

以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系， 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。

*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl PCR體系）：

PCR反應(yīng)條件

注意事項(xiàng)

· 不可用于Taqman探針法q-PCR。

· 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10^-5。

· 建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后，再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的PCR結(jié)果。

· 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的酶用量，以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。

· 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成，然而對(duì)某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請(qǐng)購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

· 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測(cè)試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測(cè)無宿主殘余DNA，能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周，擴(kuò)增活性無明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長(zhǎng)期放置，用畢放回-20度。