interchim FT-664790說(shuō)明書

pNPP溶液（ELISA用AP底物）

描述

Uptima pNPP底物是用于檢測(cè)堿性磷酸酶(AP)的顯色底物，產(chǎn)生黃色可溶性副產(chǎn)物。經(jīng)典用于ELISA技術(shù)。該處方針對(duì)較長(zhǎng)的有效期和良好的批間重現(xiàn)性進(jìn)行了優(yōu)化。在含有高純度和穩(wěn)定劑的對(duì)硝基苯基磷酸鹽(pNPP)混合物的*小瓶中對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)。與堿性磷酸酶結(jié)合物反應(yīng)后，產(chǎn)生深黃色，可在405 nm處讀取。Uptima提供了需要準(zhǔn)確和靈敏結(jié)果的優(yōu)化處方。該底物不適用于免疫化學(xué)或蛋白免疫印跡法（要求Uptima提供合適的替代底物）。

產(chǎn)品編號(hào)： UP664790，200 mL UP664791，500 mL UP664792，1 L

靈敏度 Uptima pNPP底物非常敏感，產(chǎn)生的背景非常低。

在大多數(shù)應(yīng)用中，Uptima pNPP通常優(yōu)于其他可用的AP底物，并且通常與過(guò)氧化物酶相似的顯色檢測(cè)系統(tǒng)。

穩(wěn)定性 底物在 + 4 ℃下可穩(wěn)定儲(chǔ)存30個(gè)月以上。

儲(chǔ)存條件 + 4 ℃下避光儲(chǔ)存。(L)

pNPP底物對(duì)某些儲(chǔ)存和使用條件敏感：

1. 避免直接光暴露或接觸污染物質(zhì)。

2. 請(qǐng)勿直接從瓶中移取：首先將所需溶液裝入潔凈容器中

3. 請(qǐng)勿將瓶子打開(kāi)  過(guò)長(zhǎng)

4. 采用冷凍凝膠包運(yùn)輸。請(qǐng)勿冷凍。

建議方案

Uptima pNPP為即用型。只需讓所需量達(dá)到室溫即可。

1. 可根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。*清洗微孔板，以除去未結(jié)合的堿性磷酸酶標(biāo)記探針（抗體、凝集素、核苷酸……）。沖洗不充分可能導(dǎo)致背景不理想。Uptima建議在PBST（NaCl 150 mM、磷酸鹽20 mM、Tween20®0.1%，pH 7.5）中清洗4次。

2. 向各微孔板小孔中加入150µl pNPP底物。緩慢攪拌以混勻。在 + 37 ℃下避光孵育30分鐘。立即顯色。

注：Uptima pNPP溶液為即用型。請(qǐng)勿稀釋。

可根據(jù)檢測(cè)系統(tǒng)調(diào)整每孔體積和孵育持續(xù)時(shí)間。

如果染色過(guò)快或過(guò)強(qiáng)，應(yīng)稀釋一抗或二抗，或?qū)⑷旧珪r(shí)間縮短至15 min。不建議稀釋pNPP底物

3. 在405 nm處直接讀取吸光度，或在停止步驟（第4點(diǎn)）后讀取，以獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。請(qǐng)勿比較停止和未停止時(shí)獲得的值。

4. 反應(yīng)終止（可選）：在每個(gè)孔中加入100µl終止液(1 MNaOH)。顏色保持黃色，但不波動(dòng)，允許在2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)在405 nm處讀數(shù)。

相關(guān)試劑

· 其他AP底物-顯色 其他HRP底物-顯色pNPP粉末(UP89562 C)、片劑(#UP89562F、UP73250)和試劑盒(BP708) TMB溶液(UP664780)

AP-藍(lán)色[490-650 nm](CB0131)和AP-紅色[450-550 nm](CB0141) DAB片劑732310

· 其他AP底物-熒光 FDP粉末和試劑盒(HT079) ADHP（39423A，試劑盒HS6241）

· 其他AP底物-化學(xué)發(fā)光 VisGlo AP底物(BV3021,BV3031)UptiLight ECL（UP996190,(BM4961,58372A)

· 請(qǐng)參閱我們的BioScience目錄，了解AP標(biāo)記的二抗（第A324頁(yè)）和鏈霉親和素(A350)、緩沖液和飽和劑(A365)